이봐! 저는 FMOC - HIS -AIB -OH TFA의 공급 업체이며 오늘 저는 크기를 최적화하는 방법에 대해 이야기하고 싶습니다.이 화합물의 정제를위한 배제 크로마토 그래피. 겔 - 여과 크로마토 그래피로도 알려진 크기 - 배제 크로마토 그래피는 FMOC -his -aib -Oh TFA와 같은 펩티드의 정제에 널리 사용되는 기술이다. 크기에 따라 분자를 분리하는데, 이는 순수한 제품을 얻으려고 할 때 매우 편리합니다.
먼저, 크기 제외 크로마토 그래피의 기본 사항을 이해해 봅시다. 이 크로마토 그래피의 고정상은 다공성 구슬로 구성됩니다. 작은 분자는이 모공에 들어갈 수 있지만 큰 분자는 할 수 없습니다. 결과적으로, 더 큰 분자는 컬럼을 더 빨리 통과시키고 작은 분자는 용리하는 데 시간이 오래 걸립니다. 용리 시간의 이러한 차이는 우리가 다른 크기의 분자를 분리 할 수있게합니다.
FMOC - HIS -AIB -OH TFA를 정화 할 때 프로세스를 최적화하기 위해 고려해야 할 몇 가지 요소가 있습니다.
1. 열 선택
열의 선택이 중요합니다. 올바른 기공 크기의 열을 선택해야합니다. 모공이 너무 커지면 FMOC - HIS -AIB -OH TFA 분자가 들어갈 수있어 용리가 느려지고 분리 효율에 영향을 미칩니다. 반면에, 모공이 너무 작 으면 화합물이 고정 상과 제대로 상호 작용하지 않을 수 있으며 분리되지 않을 수 있습니다.
크로스 - 연결된 덱스 트란, 아가 로스 또는 폴리 아크릴 아미드와 같은 다양한 유형의 열이 있습니다. 각각 고유 한 특성이 있습니다. 예를 들어, Dextran- 기반 컬럼은 중소형 분자를 분리하는 데 적합합니다. 그들은 상대적으로 좁은 분리 범위를 가지고 있으며, 이는 FMOC와 같은 특정 화합물을 다룰 때 유익 할 수 있습니다.
2. 이동 단계
이동상은 컬럼을 통해 샘플을 운반하는 액체입니다. 샘플과 고정 단계와 호환되는 이동 단계를 선택해야합니다. FMOC -HIS -AIB -OH TFA의 경우 일반적인 선택은 수성 완충액입니다. 버퍼의 pH가 중요합니다. pH가 너무 높거나 너무 낮 으면 FMOC (HIS -AIB -OH TFA 분자의 전하에 영향을 줄 수 있으며, 이는 고정 단계와의 상호 작용을 변화시킬 수 있습니다.
또한 버퍼의 이온 강도를 고려해야합니다. 올바른 이온 강도를 갖는 완충액은 샘플과 컬럼 사이의 비 특정 상호 작용을 방지 할 수 있습니다. 예를 들어, 완충액에 소량의 소금을 첨가하면 정전기 상호 작용이 줄어들 수 있습니다. 그러나 분리에도 영향을 줄 수 있으므로 소금을 너무 많이 넣지 않도록주의하십시오.
3. 샘플 로딩
열에 얼마나 많은 샘플을로드하는지가 중요합니다. 너무 많이로드하면 열에 과부하가 걸릴 수 있습니다. 분자는 정지상과 제대로 상호 작용할 시간이 충분하지 않기 때문에 분리가 열악해질 수 있습니다. 반면에, 너무 적게 적재하면 정제 된 제품을 충분히 얻지 못할 수 있습니다.
경험의 좋은 규칙은 소량의 샘플로 시작하고 분리 품질을 모니터링하면서 부하를 점차 증가시키는 것입니다. 또한 프리 컬럼을 사용하여 주 열로 들어가기 전에 샘플에서 큰 입자 또는 집계를 제거 할 수 있습니다. 이는 주 열을 보호하고 분리를 향상시키는 데 도움이 될 수 있습니다.
4. 유량
유속은 이동 상이 열을 통해 이동하는 속도입니다. 유량이 너무 빠르면 분자는 고정 상과 상호 작용할 시간이 충분하지 않으며 분리가 열악합니다. 유량이 너무 느리면 샘플을 용출하는 데 시간이 오래 걸리며 밴드가 넓어 질 수도 있습니다.
특정 열과 샘플의 최적 유량을 찾아야합니다. 일반적으로 유량이 비교적 낮은 유량으로 시작한 다음 분리 결과에 따라 조정하는 것이 좋습니다. 유량 컨트롤러를 사용하여 실험 전반에 걸쳐 일정한 유량을 유지할 수도 있습니다.
5. 온도
온도는 또한 크기의 분리 - 배제 크로마토 그래피에 영향을 줄 수 있습니다. 일반적으로, 온도가 높을수록 분자의 확산 속도가 증가하여 분리를 향상시킬 수 있습니다. 그러나 FMOC (HIS -AIB -OH TFA가 저하 될 수 있으므로 샘플을 너무 많이 가열하지 않도록주의해야합니다.
대부분의 경우 실온은 좋은 출발점입니다. 그러나 분리가 충분하지 않다는 것을 알게되면 온도를 약간 늘리고 차이가 있는지 확인할 수 있습니다.
이제 관련 화합물에 대해 이야기합시다. 다른 펩티드 중간체에 관심이 있다면 우리는 또한BOC- 그의 (TRT) -AIB- 오,,,fmc -l -lys- (OTB) - glu- (OTB- (OTB) - 예 - OE -OE, 그리고FMOC -GLY -ARG (PBF) -OH. 이들 화합물은 다양한 펩티드의 합성에 사용되며 유사한 크로마토 그래피 기술을 사용하여 정제 될 수있다.
결론적으로, FMOC의 정제를위한 크기 크로마토 그래피 최적화 - HIS -AIB -OH TFA는 열 선택, 이동 상, 샘플 로딩, 유량 및 온도를 포함한 여러 요인을 신중하게 고려해야합니다. 미세 - 이러한 매개 변수를 조정하면 고품질 분리를 달성하고 순수한 제품을 얻을 수 있습니다.
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참조
- Snyder, LR, Kirkland, JJ 및 Glajch, JL (2010). 실용적인 HPLC 방법 개발. John Wiley & Sons.
- Hermanson, GT (2013). Bioconjugate 기술. 학업 언론.