이봐! FMOC- 그의 -AIB -OH TFA의 공급 업체로서, 나는 정제를 위해 역상 크로마토 그래피의 세계로 깊이 빠져 나왔습니다. 리버스 - 위상 크로마토 그래피는 정제 과정에서 방법으로 이동하지만, 바로 얻는 것은 약간의 어려운 일이 될 수 있습니다. 이 블로그에서는이 프로세스를 최적화하는 방법에 대한 몇 가지 팁을 공유하겠습니다.
먼저, 기본 사항을 이해합시다. 역 - 상 크로마토 그래피는 소수성에 기초하여 화합물을 분리합니다. FMOC -HIS -AIB -OH TFA의 경우 다른 불순물에서 효과적으로 분리하고 싶습니다. 역 상 크로마토 그래피의 고정상은 일반적으로 C18 컬럼과 같이 소수성이며, 이동상은 물과 같은 극성 용매 및 아세토 니트릴 또는 메탄올과 같은 유기 용매의 혼합물입니다.
오른쪽 열을 선택합니다
열의 선택이 중요합니다. FMOC -HIS -AIB -OH TFA의 경우 고품질 C18 열이 종종 훌륭한 옵션입니다. 열의 길이와 직경도 중요합니다. 더 긴 열은 더 나은 분리를 제공 할 수 있지만 분석 시간을 증가시킬 수 있습니다. 반면에 더 짧은 열은 프로세스 속도를 높일 수 있지만 약간의 해결책을 희생 할 수 있습니다.
내가 FMOC를 정화하기 시작했을 때 - 그의 -AIB -OH TFA를 시작했을 때, 나는 다른 C18 컬럼을 실험했다. 일부 기둥은 탄소 하중이 더 높았으므로 소수성이 더 높았습니다. 이것은 더 많은 소수성 불순물을 유지하는 데 좋았지 만, 나는 FMOC - 그의 -AIB -OH TFA 자체를 유지하지 않도록주의해야했습니다.
고려해야 할 또 다른 점은 컬럼 포장의 입자 크기입니다. 더 작은 입자 크기는 일반적으로 더 나은 해상도를 제공하지만 시스템의 배압을 증가시킬 수 있습니다. 따라서 크로마토 그래피 시스템의 기능을 기반으로 균형을 찾아야합니다.
이동 단계 최적화
이동상은 화합물을 기둥을 통해 움직이는 "캐리어"와 같습니다. 물 대 유기 용매의 비율이 핵심 요소입니다. FMOC -HIS -AIB -OH TFA의 경우 구배 용리가 종종 사용됩니다. 이는 물의 비율이 높고 점차적으로 유기 용매의 백분율을 증가시키는 것을 의미합니다.
나는 보통 약 90%의 물과 10% 아세토 니트릴의 이동상으로 시작합니다. 이를 통해 더 많은 극성 불순물이 먼저 용리 될 수 있습니다. 아세토 니트릴 백분율을 늘리면 FMOC -his -AIB -OH TFA가 컬럼을 통과하기 시작합니다. 유기 용매 백분율을 증가시키는 비율이 중요합니다. 너무 빨리 증가 시키면 분리가 충분하지 않을 수 있으며 FMOC - 그의 -AIB -OH TFA에는 약간의 불순물이 나올 수 있습니다. 너무 느리게 증가 시키면 분석 시간이 매우 길어집니다.
이동 단계의 pH도 역할을합니다. FMOC -HIS -AIB -OH TFA는 산성 및 기본 기능 그룹을 가지고 있으므로 pH를 조정하면 전하 및 소수성이 변경 될 수 있습니다. 나는 종종 PH를 제어하기 위해 포스페이트 완충액과 같은 완충제를 사용합니다. 약 2-3은 일반적으로 좋은 출발점입니다. 기본 그룹을 양자화하고 화합물을보다 소수성으로 만들 수 있기 때문입니다.
온도 제어
온도는 역 상 크로마토 그래피에서 분리에 영향을 줄 수 있습니다. 일반적으로 온도를 높이면 이동상의 점도가 감소하여 용리 시간이 더 빨라질 수 있습니다. 그러나 화합물의 보유 거동을 변화시킬 수 있습니다.
FMOC -HIS -AIB -OH TFA의 경우 약 25-30 ° C의 온도가 잘 작동한다는 것을 알았습니다. 이 온도에서는 분리가 좋으며 분석 시간이 합리적입니다. 온도가 너무 높으면 화합물이 저하 될 수 있고 너무 낮 으면 분리가 효율적이지 않을 수 있습니다.
샘플 준비
적절한 샘플 준비가 필수적입니다. 나는 항상 FMOC- 그의 -AIB -OH TFA 샘플을 적합한 용매에 녹여야합니다. 물의 혼합물과 이동 상에 사용되는 유기 용매는 종종 좋은 선택입니다. 이를 통해 샘플이 이동상과 호환되며 크로마토 그래피 시스템에 부드럽게 주입 할 수 있습니다.
또한 주사 전에 샘플을 필터링하여 미립자 물질을 제거합니다. 이렇게하면 컬럼의 막힘을 방지하고 크로마토 그래피 시스템을 보호 할 수 있습니다. 0.22- 미크론 필터는 일반적 으로이 목적으로 충분합니다.
모니터링 및 검증
정제 과정에서 크로마토 그램을 모니터링하는 것이 중요합니다. UV 검출기를 사용하여 화합물의 용리를 모니터링합니다. FMOC -HIS -AIB -OH TFA에는 특징적인 UV 흡수 피크가있어 열을 통해 진행 상황을 추적 할 수 있습니다.
정화 후 결과를 검증합니다. 나는 질량 분석법과 같은 기술을 사용하여 정제 된 FMOC (HIS -AIB -OH TFA 및 고성능 액체 크로마토 그래피)의 동일성을 확인하여 순도를 확인합니다. 순도가 마크에 달려 있지 않으면, 나는 뒤로 가서 크로마토 그래피 매개 변수를 조정합니다.
관련 화합물 및 링크
그건 그렇고, 관련 화합물에 관심이 있으시면 확인하십시오.Octadecanedioic acid mono -tert- 부틸 에스테르,,,tbuo -he -gal (aoe -aoe) - otbue, 그리고fmoc -thr (tbu) -Phe -Oh. 이 화합물은 제약 산업에서도 중요하며 연구 또는 생산과 관련이있을 수 있습니다.
결론
FMOC의 정제를위한 역 위상 크로마토 그래피 최적화 - 그의 -AIB -OH TFA는 인내와 실험이 필요한 과정입니다. 열을주의 깊게 선택하고, 이동상 최적화, 온도 제어, 샘플 준비, 결과를 모니터링하고 검증하면 고품질 정화를 달성 할 수 있습니다.
FMOC 시장에 나와 있다면 - AIB -OH TFA 또는 정제 과정에 대해 궁금한 점이 있으시면 주저하지 말고 조달 토론을 위해 연락하십시오. 우리는 당신이 당신의 요구에 맞는 최고의 품질의 제품을 얻도록 돕기 위해 왔습니다.
참조
- Snyder, LR, Kirkland, JJ 및 Glajch, JL (2010). 실용적인 HPLC 방법 개발. John Wiley & Sons.
- 맥 마스터, MC (2006). 제약 과학자를위한 HPLC. 와일리 - 비교.